双荧光素酶报告基因检测（microRNA 靶基因验证）

【技术简介】

（1）技术原理

双荧光素酶报告基因实验也是验证microRNA与靶基因或靶位点相互作用的常用技术。miRNAs常与靶基因的非翻译区（常为3’UTR）结合，从而抑制整个mRNA的翻译。在体外验证实验中，常将预测靶基因的3’UTR或预测靶位点构建至荧光素酶编码区的下游，从而根据发光情况判断mRNA与预测靶基因的直接作用关系。

（2）技术应用

    microRNA广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中，调控生物体生长发育和各种疾病发生等过程中相关基因的表达。它的异常表达可能会导致生理状态的异常和疾病的产生，在多种癌症中，miRNA的表达水平会发生明显改变，有可能引起原癌基因和抑癌基因的异常表达，从而导致肿瘤的发生恶化等。此外，在许多其他的病变组织或细胞中也检测到了miRNA的异常表达。miRNA可同时调控多个靶基因，从而影响细胞的功能。miRNA调控靶基因的验证常是荧光报告素酶活性检测，结合软件预测及蛋白验证，提高靶点预测的精确性及可行性。

【服务内容】

构建荧光素酶载体（或客户自备载体）；细胞培养与转染；荧光素酶检测；数据分析。

【客户须知及标本要求】

（1）客户须明确检测目的和具体要求，最好能提供1~2篇文献或资料；

（2）客户可自备载体；

（3）客户需提供：miRNA与靶基因的信息；相应检测细胞株。