串联亲和纯化(TAP)-质谱鉴定

【技术简介】

（1）技术原理

串联亲和纯化（tandem affinity purification, TAP）技术基本原理包括：重组构建带有两种亲和纯化标签的融合靶蛋白，然后转染到宿主细胞或组织，带标签的靶蛋白表达并结合上相关蛋白质后，利用标签与相应磁珠作用，两步纯化得到相关蛋白质。TAP技术联合质谱对纯化后的蛋白质进行分析，通过生物信息学获得的蛋白相关性可信度高，为后续的验证工作节省大量时间。

（2）技术应用

    TAP与质谱技术联用已成为一种高效且实用的方法，在生物大分子相互作用领域中被广泛应用。近些年，随着TAP标签的全面改进和质谱技术的不断发展，TAP-MS的灵敏度与专一性得到很大提高，使得该技术得以在更多领域发挥重要作用，也使得我们对蛋白质复合体进行系统性研究成为可能。

【服务内容】

构建融合Flag-HA的诱饵蛋白真核表达载体或者慢病毒载体；载体瞬时转染靶细胞或包装慢病毒感染靶细胞；TAP纯化互作蛋白；质谱鉴定互作蛋白。

【客户须知及标本要求】

（1）客户须明确检测目的和具体要求，最好能提供1~2篇文献或资料。

（2）SDS-PAGE条带：考染，条带清晰可见；蛋白质溶液：蛋白质总量>5μg/μl。

（3）蛋白洗脱液：定量并计算总蛋白量，真空干燥后，密封好管口，冰袋包装寄送。

（4）蛋白质条带（考染）：从凝胶上割取条带时，避免污染，将条带放入EP管内，密封好管口，冰袋包装寄送。