免疫印迹（Western Blot）

【技术简介】

（1）技术原理

      蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。蛋白质样品经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

（2）技术应用

      Western印迹法主要用于未知蛋白质的检测及抗原组分、抗原决定蔟的分子生物学的测定；也可用于未知抗体的检测和单克隆抗体的鉴定等，同时可用于疾病的早期诊断和预后的跟踪分析检测。

【服务内容】

提取蛋白、测定蛋白浓度、蛋白SDS-PAGE或PAGE凝胶电泳、转膜、封闭、抗体杂交、显色，实验结束提供完整的实验报告，包括实验方法及免疫印迹的实验结果的相关图表。

【客户须知及标本要求】

（1）客户须明确检测目的和具体要求，最好能提供1~2篇文献或资料。

（2）客户提供的标本需要新鲜或取材后-80℃保存，避免蛋白的降解；标本反复冻融不得超过2次以上。

（3）如提供组织，需0.5g以上；如提供细胞，细胞数应达到1×10⁶以上。

（4）客户提供足够实验用量的特异性一抗，抗体应在gnaling technology，Abcam，Cayman Chemical，Santan Cruz，Zymed等知名抗体公司购买保证质量。

                                actin 1                                                                       p38